Responsável: Luciana Costa
Financiamento e data: Comissão de Fomento da Investigação em Cuidados de Saúde (2007-2008)
Introdução: A doença de Behçet (DB) é uma patologia sistémica rara de natureza inflamatória crónica e de etiologia ainda desconhecida. Dada a ausência de marcadores laboratoriais específicos, o diagnóstico da DB permanece baseado em critérios clínicos. Estudos anteriores sugerem que um desequilíbrio no balanço pró-oxidante/antioxidante (BPox/Aox) associado a alterações substanciais da função imunitária poderão estar na origem da patogénese desta doença. Em 1993 criou-se em Portugal o “Grupo Nacional de Estudo da Doença de Behçet” (GNEDB) de forma a aprofundar o conhecimento sobre a DB no nosso país, nomeadamente no que diz respeito à sua epidemiologia.
Objectivos: O objectivo principal deste projecto é contribuir em colaboração directa com o GNEDB para o melhoramento e actualização dos dados epidemiológicos reunidos até à data sobre a DB em Portugal. Por outro lado, propõe-se a procura de marcadores laboratoriais específicos da DB e a clarificação dos mecanismos moleculares envolvidos na interacção funcional entre o BPox/Aox e o sistema imunológico nesta patologia. Neste âmbito, pretende-se realizar uma rigorosa caracterização clínica e laboratorial de doentes de Behçet com especial relevância para a medição de marcadores imunológicos envolvidos na defesa antioxidante. Por último, propõe-se a pesquisa de uma potencial associação entre os vários parâmetros estudados relacionando-os com a severidade e/ou o estadio da doença.
Materiais e métodos: Neste estudo serão utilizados 40 indivíduos clinicamente diagnosticados com DB. Todos os ensaios efectuados nestes doentes serão realizados paralelamente em amostras obtidas a partir de 40 indivíduos saudáveis, da mesma idade e do mesmo sexo. A caracterização hematológica das amostras apoiar-se-á na realização do hemograma completo. A caracterização bioquímica incluirá a quantificação colorimétrica de alguns marcadores séricos do metabolismo do ferro (Fe) (Fe sérico, transferrina e CTFF), enquanto a quantificação da ferritina no soro será efectuada por imunometria. A avaliação do BPox/Aox apoiar-se-á nas seguintes estratégias experimentais: i) quantificação sérica/celular do cobre, Fe, selénio, zinco, manganês, potássio e cálcio através da técnica de PIXE; ii) quantificação por citometria de fluxo da produção de radicais livres produzidos pelos leucócitos. iii) medição dos níveis de marcadores de stress oxidativo (óxido nítrico, mieloperoxidase e elastase) usando ensaios imunoenzimáticos; iv) medição de indicadores de oxidação lipídica (níveis de LDL oxidadas e do malondialdeído) através do uso de técnicas de ELISA e HPLC, respectivamente; v) medição de componentes do sistema antioxidante (paraoxonase, catalase, lactoferrina e determinação do ratio glutationo reduzido/oxidado) utilizando ensaios imunoenzimáticos. A caracterização imunológica far-se-á através da análise das populações linfocitárias e do estudo da expressão da ceruloplasmina (Cp) leucocitária usando a técnica de citometria de fluxo paralelamente à quantificação da Cp e Proteína C Reactiva séricas realizada por nefelometria. A caracterização molecular consistirá na pesquisa por PCR das mutações/polimorfismos mais frequentemente associadas à DB enquanto a quantificação do mRNA das formas de Cp celular e secretada será efectuada por PCR em tempo real após extracção de RNA a partir de leucócitos do sangue periférico.
Resultados esperados: No seu conjunto, os resultados esperados poderão contribuir para um melhor conhecimento da epidemiologia da DB em Portugal e para o esclarecimento do(s) mecanismo(s) moleculares envolvido(s) na sua etiologia e patogénese.